液相色谱柱可谓整个HPLC系统的心脏，其状态好坏直接决定了分离效果和数据可靠性。一根色谱柱价格不菲，精心呵护的色谱柱寿命可达数百甚至上千次进样，反之则可能迅速报废。掌握正确的日常维护方法，是每位色谱工作者必备的核心技能！

核心日常维护要点：

彻底冲洗，杜绝残留 (重中之重！)

每日实验结束： 无论当天使用何种流动相（特别是有缓冲盐、离子对试剂或强酸强碱时），务必进行彻底冲洗。

正确冲洗方法：

避免直接切换极端溶剂： 严禁直接从高比例水相突然切换到纯有机相（如乙腈、甲醇）或反之，这会导致盐析出或柱床塌陷风险剧增！常见错误点

推荐程序：

含缓冲盐/离子对试剂： 先用5-10%有机相（与水互溶，如甲醇、乙腈）的水溶液冲洗15-20柱体积（计算：柱体积mL * 柱体积数），洗去盐分。然后缓慢逐步增加有机相比例至100%，再冲洗15-20柱体积。最后保存在合适纯度的有机相中。

纯水相/缓冲盐结束： 先用上述5-10%有机相水溶液过渡，再逐步增加有机相至100%并冲洗保存。

强酸/强碱后： 务必先用中性流动相（如pH 6-8的水/有机相混合液）充分冲洗（至少15-20柱体积），中和体系，再过渡到纯有机相保存。强酸强碱对固定相损伤极大

冲洗流速： 推荐使用比分析流速略低或相同的流速（如0.8-1.0 mL/min 对于4.6mm内径柱），保证有效冲洗同时避免过高压力。

保持“洁净”，严防污染

流动相： 务必使用HPLC级溶剂和超纯水。所有水相缓冲液必须现配现用，并确保充分溶解、无颗粒或微生物滋生。微生物污染是水相常见杀手

样品前处理：强烈建议 所有样品进柱前都进行适当的净化处理，如：

过滤： 使用0.22 µm 或 0.45 µm 的滤膜过滤（水性样品用亲水膜，有机样品用疏水膜）。有效拦截颗粒物堵塞柱头和筛板

沉淀蛋白/离心： 对于复杂生物基质样品尤为重要。

固相萃取： 更高效的净化方法，适用于复杂样品。

系统保护：

始终使用在线过滤器/保护柱： 在线滤器安装在进样器之前，保护整个系统管路和色谱柱入口。保护柱（直接连接在主柱前）含有少量与主柱相同或相似填料的短柱，能优先吸附样品和流动相中的强保留杂质，是延长主柱寿命最具性价比的投资。保护柱筛板或柱芯需要定期更换。

定期冲洗/更换溶剂瓶入口过滤头。

压力监控，问题早发现

记录基线压力： 在冲洗完成、系统平衡后，使用100%纯有机相冲洗时，记录下系统在常用流速下的稳定压力值（例如，1.0 mL/min 流速下压力）。

每日关注压力变化：

压力显著升高 (如升高 >500 psi / 35 bar)： 通常是堵塞的信号（柱头筛板、在线滤器、保护柱或柱内填料）。立即排查：分段断开管路，从检测器端开始反向逐步检查压力来源。

压力显著降低： 可能发生漏液或柱内出现沟流/塌陷。

压力波动： 可能由泵故障、漏液或气泡引起。

温和操作，避免“硬伤”

流速控制： 避免在超过色谱柱最大耐受压力或流速的条件下运行（参考柱说明书）。突然施加或改变高流速（尤其对旧柱）风险很高。

温度控制： 使用柱温箱维持恒定温度。避免温度剧烈波动或超过色谱柱标称的最高使用温度。

物理防护： 避免色谱柱受到剧烈震动或撞击。连接管路时避免过度用力。

正确保存，至关重要

长期不用： 必须按色谱柱说明书要求保存在合适的溶剂中（通常是纯有机相，如甲醇或乙腈）。

反相柱：推荐保存在甲醇或乙腈中。

正相柱： 保存在非极性溶剂中（如正己烷）。

离子交换柱：通常保存于含一定比例有机溶剂（如20%甲醇）的水中，有时需添加防腐剂。

避免干燥： 对于大多数硅胶基质的色谱柱（尤其是反相柱），绝对避免让其完全干燥！干燥会导致键合相塌陷或开裂，严重损坏柱子。硅胶基质干燥后难以恢复

堵紧堵头： 保存时确保柱两端堵头密封良好，防止溶剂挥发和空气进入。

记录保存状态。

遇到问题怎么办？ (快速排查)

压力异常高： 1) 卸下保护柱/在线滤器，检查压力是否恢复；2) 分段检查泵、混合器、进样器、检测器的入口管路/滤器。

峰形拖尾/分叉： 1) 可能柱头塌陷或污染，尝试用强溶剂冲洗或反向冲洗（如厂商允许）；2) 检查保护柱状态；3) 检查进样量是否过大或样品溶剂过强。

保留时间漂移： 1) 系统未充分平衡；2) 温度波动大；3) 流动相比例或pH不准/变化；4) 柱效下降或污染。

柱效下降 (理论塔板数降低)： 通常是柱污染或柱床受损的信号。尝试再生冲洗（严格按说明书方法操作），若无效则可能需更换保护柱或主柱。

关键注意事项总结：

过滤！过滤！过滤！ (流动相 & 样品)

彻底冲洗！ (尤其使用缓冲盐/离子对试剂/强酸强碱后)

用保护柱！ (保护主柱，定期更换)

温和操作！ (切勿超压超温，避免冲击)

正确保存！ (用指定溶剂，避免干燥)

勤监测压力！ (早发现早解决)

投资时间做好日常维护，就是为您的实验数据质量与预算负责！ 遵循以上准则，您的液相色谱柱将保持高效、稳定运行，为您的分析工作提供持久可靠的支持。一根精心维护的